1999年，賴雅妍參加《我猜我猜我猜猜猜》人不可貌相單元之搞笑美女選拔並脫穎而出。

2002年，賴雅妍因拍攝周渝民的《求救專線》MV而被製作人柴智屏相中並簽約踏入演藝圈。

2005年，賴雅妍憑借主演電影《生命狂想曲》獲得第 40 屆金鐘獎最佳女主角和第 42 屆金馬獎最佳新演員兩項提名 。2006年，賴雅妍憑借電影《生命狂想曲》和《巧克力重擊》獲得第51屆亞太影展最佳女主角提名。2009年，賴雅妍主演了愛情劇《星光下的童話》。

2011年，賴雅妍憑借時代劇《瑰寶1949》獲得第46屆台灣電視金鐘獎最佳女主角提名 。2014年，賴雅妍憑借都市劇《家事提案》獲得第49屆金鐘獎迷你劇集最佳女主角獎提名。2015年3月，賴雅妍發行了第二張個人專輯《FACE》；同年，賴雅妍還憑借愛情劇《愛上哥們》獲得了台灣華劇大賞最佳女演員獎 。2017年1月，其出演的愛情片《一萬公里的約定》上映 。